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色譜柱使用的一般注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2023-08-15      點(diǎn)擊次數(shù):2286
 
 1. 色譜柱各部分名稱(chēng)


 2. 色譜柱的安裝

(1) 安裝色譜柱前請(qǐng)先將設(shè)備中的流路充分洗凈,置換成流動(dòng)相。另外,請(qǐng)切換閥清洗并置換進(jìn)樣器的流路(進(jìn)樣環(huán))。置換不互溶或溶解性低的溶劑時(shí),先使置換為雙方溶劑都能互溶的溶劑,再置換成使用溶劑。
(例1)從氯仿置換成水的時(shí)候,先置換為甲醇,再置換成水。
(例2)從高濃度緩沖溶液(或鹽的水溶液)置換成水/乙腈的時(shí)候,先置換為水,再置換成水/乙腈。
 

注意 色譜柱不能使用的溶劑在流路中殘留可能會(huì)造成色譜柱的劣化。
注意 流動(dòng)相組成發(fā)生顯著變化,可能造成泵、管路中的污垢脫落,可能會(huì)造成色譜柱的劣化。
(2) 查看色譜柱身標(biāo)簽,然后將色譜柱連接到設(shè)備,使流動(dòng)相沿流動(dòng)方向(?)流動(dòng)。 使用保護(hù)柱時(shí),請(qǐng)依次先連接保護(hù)柱,再連接分析柱。
(3) 請(qǐng)一邊按住管路一邊擰緊色譜柱的末端接頭,防止管路和末端接頭中產(chǎn)生空隙??障稌?huì)造成樣品的擴(kuò)散,導(dǎo)致色譜峰變寬。
(4) 將流速設(shè)置為小于正常流速的一半,然后開(kāi)始送液。 在升溫使用色譜柱時(shí),以低流送液直到達(dá)到設(shè)定溫度,然后逐漸將流速增加到所需流速。
 
警告 請(qǐng)檢查溶劑是否泄露。否則可能會(huì)造成漏電、腐蝕或化學(xué)損壞。
注意 色譜柱連接入設(shè)備時(shí),請(qǐng)注意不要使氣泡進(jìn)入色譜柱,否則可能造成色譜柱劣化。
注意 當(dāng)連接色譜柱或從停止送液的狀態(tài)開(kāi)始送液時(shí),以小于正常流速一半的流速送液,壓力突然升高可能會(huì)使色譜柱劣化。
注意 升溫使用色譜柱后,將流速降低至正常流速的一半以下并繼續(xù)送液,柱溫恢復(fù)至室溫,然后停泵。 否則洗脫液冷卻時(shí)發(fā)生收縮,在色譜柱內(nèi)形成空隙可能導(dǎo)致色譜柱劣化。

3. 樣品配制

(1) 盡量使用流動(dòng)相溶解和稀釋樣品。 如果難以溶解在流動(dòng)相中,請(qǐng)盡量和流動(dòng)相組成接近。 對(duì)于梯度洗脫,建議使用初始流動(dòng)相配制樣品。
(2) 為了防止由于顆粒物(不溶物)的堵塞導(dǎo)致色譜柱變差,劣化或性能變差,請(qǐng)使用濾膜(0.45μm)過(guò)濾樣品。
(3) 為了保護(hù)分析柱,建議使用保護(hù)柱。
 

參考 保護(hù)柱可保持分析柱的性能,并沒(méi)有提高分離性能的作用。

4. 流動(dòng)相配制

(1) 流動(dòng)相請(qǐng)充分脫氣防止有氣泡。
(2) 流動(dòng)相中含有不溶的雜質(zhì)可能會(huì)導(dǎo)致色譜柱性能下降和色譜圖噪聲,因此請(qǐng)使用濾膜(0.45μm)過(guò)濾流動(dòng)相。
(3) 確認(rèn)色譜柱的儲(chǔ)存溶劑,置換不互溶或溶解性低的溶劑時(shí),先置換成雙方溶劑都能互溶的溶劑,再置換成使用溶劑。
(4) 置換流動(dòng)相時(shí),請(qǐng)使用通常流速一半以下的流速送液。
(5) 進(jìn)行梯度洗脫時(shí),由于流動(dòng)相組成的變化,色譜柱壓力可能會(huì)超過(guò)梯度洗脫過(guò)程中的最大使用壓力。 請(qǐng)調(diào)整流速和色譜柱溫度,以免超出最大使用壓力。
 

注意 使用水時(shí),請(qǐng)使用超純水裝置新配制的水或者剛開(kāi)封的HPLC級(jí)蒸餾水。使用有機(jī)溶劑時(shí),請(qǐng)使用HPLC級(jí)以上的試劑,開(kāi)封長(zhǎng)時(shí)間的有機(jī)溶劑可能有性質(zhì)改變、吸濕、污染的問(wèn)題,請(qǐng)不要使用。
注意 請(qǐng)勿使用已長(zhǎng)時(shí)間保存的流動(dòng)相,組成的變化可能導(dǎo)致洗脫行為的變化和色譜柱的劣化。
注意 如果使用腐蝕性較強(qiáng)的鹽(例如氯化鈉),請(qǐng)?jiān)诜治龊髮⑵湎磧簦悦恹}殘留在設(shè)備或色譜柱上,設(shè)備和色譜柱可能會(huì)生銹。
參考 建議使用在線(xiàn)脫氣機(jī)。
參考 請(qǐng)?jiān)O(shè)置泵的報(bào)警壓力,以避免超過(guò)最大可用壓力。

5. 色譜柱清洗方法

流路或者樣品中有不溶物質(zhì)或者吸附性物質(zhì)殘留在色譜柱內(nèi),可能會(huì)影響色譜柱的洗脫及壓力的變化,這種情況清洗色譜柱可能有改善效果。使用保護(hù)柱時(shí),請(qǐng)先去除保護(hù)柱進(jìn)行檢測(cè),如果效果改善了,則可能是保護(hù)柱的原因,請(qǐng)清洗保護(hù)柱。
如果去除了保護(hù)柱仍然沒(méi)有改善,請(qǐng)分別清洗保護(hù)柱和分析柱,請(qǐng)注意把保護(hù)柱和分析柱分開(kāi)清洗。清洗色譜柱時(shí),請(qǐng)不要連接檢測(cè)器,流動(dòng)相從色譜柱流出后直接流入廢液缸即可。

(1) 如果不溶物堵在色譜柱入口,可以逆接色譜柱并以小于正常流速一半的流速通流動(dòng)相來(lái)將其除去。
(2) 其他的清洗方法請(qǐng)參考各產(chǎn)品的使用說(shuō)明書(shū)。
 
6. 色譜柱的保存

置換成出廠(chǎng)時(shí)的儲(chǔ)存溶劑,從裝置中卸下色譜柱并擰緊兩端堵頭,在溫度變化小的陰暗處儲(chǔ)存。
 

注意 色譜柱內(nèi)絕對(duì)不能干燥,否則可能導(dǎo)致色譜柱劣化。

7. 色譜柱的檢定方法

檢定條件請(qǐng)參考各產(chǎn)品包裝盒中的出廠(chǎng)報(bào)告(Certificate of Analysis)。理論塔板數(shù)(N)和不對(duì)稱(chēng)系數(shù)(Fas)請(qǐng)通過(guò)如下方法計(jì)算。
 


 
8. 色譜柱的廢棄方法

通常實(shí)驗(yàn)中使用的色譜柱應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)卣囊?guī)定,作為工業(yè)廢棄物進(jìn)行處置。
 
9. 其它注意事項(xiàng)

(1) 請(qǐng)勿擰開(kāi)色譜柱的末端螺絲。
(2) 請(qǐng)勿對(duì)色譜柱施加敲擊,掉落等強(qiáng)烈沖擊。

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